นโยบายการจัดการความรู้ มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 1.ให้ใช้เครื่องมือการจัดการความรู้ผลักดัน คุณภาพคน และกระบวนทำงาน 2.ส่งเสริมการแลกเปลี่ยนประสบการณ์การทำงาน จากหน้างาน 3.ส่งเสริมให้มีเวทีเรียนรู้ร่วมกัน

ลูกหว้า
Ico64
Miss Benjaporn Nooklay
นักวิทยาศาสตร์
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์
Network
Members · Following: 1 · Followed: 2

อ่าน: 2207
ความเห็น: 0

เตรียมตัวอย่างทางชีวภาพ ด้วย Fixing agent

การเตรียมตัวอย่างทางชีวภาพสำหรับงาน TEM และ SEM
     ในกรณีที่ต้องศึกษาตัวอย่างด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างทางชีวภาพนั้นมีความสำคัญมาก วัตถุประสงค์เพื่อให้ตัวอย่างมีรูปร่าง โครงสร้างและขนาดใกล้เคียงกับสภาพธรรมชาติมากที่สุด ดังนั้น เซลล์หรือเนื้อเยื่อๆ ที่ผ่านการเลือกบริเวณมาแล้ว จะต้องนำมาแช่ในน้ำยาดองเพื่อรักษาสภาพให้คงเดิม หรือใกล้เคียงกับที่เป็นอยู่เดิมให้มากที่สุด หรือเรียกว่า fixing agent ที่นิยมใช้กัน ได้แก่

 

     พวก aldehyde เช่น glutaraldehyde และ paraformadehyde ซึ่งมักใช้ในการ fix ครั้งแรก (primary fixation หรือ prefixation)
     ส่วน osmium tetroxide (OsO4) นิยมใช้ในการ fix ครั้งที่ 2 (secondary fixation หรือ postfixation)

 

    สำหรับตัวอย่างที่ดูกับเครื่อง SEM นั้น ทำการfix ด้วย glutaraldehyde ก็พอแล้วค่ะ แต่ถ้าเป็นตัวอย่างที่ดูกับเครื่อง TEM ต้องเพิ่มการ fix ด้วย OsO4 อีกครั้งนึง

 

ที่นี้ก็มาดูกันว่าแต่ละตัวทำหน้าที่อย่างไรบ้าง

 

    สำหรับ glutaraldehyde สามารถทำปฏิกริยาได้ีดีกับโปรตีน แต่จะไม่มีผลกับไขมัน ซึ่งจะตรงกันข้ามกับ OsO4 อย่างไรก็ตามหากไขมันไม่ถูก fix  ไขมันจะสลายตัวได้ถึง 95% ในระหว่างการ dehydration

 

     ข้อเสียของ glutaraldehyde คือ ต้องเตรียมใหม่ทุกครั้งที่ต้องการจะ fix ตัวอย่าง หากเตรียมไว้นานๆ จะเสื่อมคุณภาพและจะเกิดกรดจาก oxidation glutaraldehyde มีราคาแพง โดยเฉพาะที่ใช้กับงานด้านจุลทรรศน์ิอิเล็กตรอน (E.M. Grade) แต่ได้รับความนิยมสูง เพราะมีประสิทธิภาพในการ fix สูง
     บล็อคหน้ามารู้จักกับ OsO4 กัน
หมวดหมู่บันทึก: พัฒนางานประจำ
สัญญาอนุญาต: ซีซี: แสดงที่มา-ไม่ใช้เพื่อการค้า-อนุญาตแบบเดียวกัน Cc-by-nc-sa
สร้าง: 09 เมษายน 2556 16:35 แก้ไข: 09 เมษายน 2556 16:37 [ แจ้งไม่เหมาะสม ]
ดอกไม้
สมาชิกที่ให้กำลังใจ: Ico24 DaDa, Ico24 Our Shangri-La, และ 5 คนอื่น.
สมาชิกที่ให้กำลังใจ
 
Facebook
Twitter
Google

บันทึกอื่นๆ

ความเห็น

ไม่มีความเห็น

ร่วมแสดงความเห็นในหน้านี้

ชื่อ:
อีเมล:
IP แอดเดรส: 3.236.175.108
ข้อความ:  
เรียกเครื่องมือจัดการข้อความ
   
ยกเลิก หรือ