เตรียมตัวอย่างทางชีวภาพ ด้วย Fixing agent

     ในกรณีที่ต้องศึกษาตัวอย่างด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างทางชีวภาพนั้นมีความสำคัญมาก วัตถุประสงค์เพื่อให้ตัวอย่างมีรูปร่าง โครงสร้างและขนาดใกล้เคียงกับสภาพธรรมชาติมากที่สุด ดังนั้น เซลล์หรือเนื้อเยื่อๆ ที่ผ่านการเลือกบริเวณมาแล้ว จะต้องนำมาแช่ในน้ำยาดองเพื่อรักษาสภาพให้คงเดิม หรือใกล้เคียงกับที่เป็นอยู่เดิมให้มากที่สุด หรือเรียกว่า fixing agent ที่นิยมใช้กัน ได้แก่

     พวก aldehyde เช่น glutaraldehyde และ paraformadehyde ซึ่งมักใช้ในการ fix ครั้งแรก (primary fixation หรือ prefixation)

     ส่วน osmium tetroxide (OsO₄) นิยมใช้ในการ fix ครั้งที่ 2 (secondary fixation หรือ postfixation)

    สำหรับตัวอย่างที่ดูกับเครื่อง SEM นั้น ทำการfix ด้วย glutaraldehyde ก็พอแล้วค่ะ แต่ถ้าเป็นตัวอย่างที่ดูกับเครื่อง TEM ต้องเพิ่มการ fix ด้วย OsO₄ อีกครั้งนึง

ที่นี้ก็มาดูกันว่าแต่ละตัวทำหน้าที่อย่างไรบ้าง

    สำหรับ glutaraldehyde สามารถทำปฏิกริยาได้ีดีกับโปรตีน แต่จะไม่มีผลกับไขมัน ซึ่งจะตรงกันข้ามกับ OsO₄ อย่างไรก็ตามหากไขมันไม่ถูก fix  ไขมันจะสลายตัวได้ถึง 95% ในระหว่างการ dehydration

     ข้อเสียของ glutaraldehyde คือ ต้องเตรียมใหม่ทุกครั้งที่ต้องการจะ fix ตัวอย่าง หากเตรียมไว้นานๆ จะเสื่อมคุณภาพและจะเกิดกรดจาก oxidation glutaraldehyde มีราคาแพง โดยเฉพาะที่ใช้กับงานด้านจุลทรรศน์ิอิเล็กตรอน (E.M. Grade) แต่ได้รับความนิยมสูง เพราะมีประสิทธิภาพในการ fix สูง

     บล็อคหน้ามารู้จักกับ OsO₄ กัน